Topmusicanswers
Jumlah total DNA dalam PCR memiliki efek yang nyata pada hasil prosedur PCR. Menggunakan terlalu banyak DNA total menghasilkan DNA yang dikemas dalam ruang terbatas dari bejana reaksi dan dapat menyebabkan priming yang salah dan bahkan sintesis DNA yang buruk karena difusi yang terhambat dari molekul Taq polimerase besar.
- Berapa banyak template yang harus saya tambahkan ke PCR?
- Bisakah terlalu banyak primer menghambat PCR??
- Apa yang dapat menyebabkan reaksi PCR gagal??
- Berapa banyak DNA yang cukup untuk PCR??
Berapa banyak template yang harus saya tambahkan ke PCR?
Meskipun secara teori, satu molekul templat akan cukup, jumlah DNA yang jauh lebih besar biasanya digunakan untuk PCR klasik, misalnya, hingga 1 g DNA mamalia genom dan sesedikit 1 pg DNA plasmid (1).
Bisakah terlalu banyak primer menghambat PCR??
Kontaminan dalam campuran dNTP dapat menyebabkan amplifikasi yang tidak lengkap atau salah atau penghambatan PCR. Gunakan dNTP berkualitas tinggi. Menggunakan konsentrasi primer yang berlebihan dapat meningkatkan kemungkinan primer mengikat secara tidak spesifik ke situs yang tidak diinginkan pada template atau satu sama lain.
Apa yang dapat menyebabkan reaksi PCR gagal??
Melupakan hanya satu komponen dari reaksi PCR, apakah itu DNA polimerase, primer atau bahkan DNA template, akan menghasilkan reaksi yang gagal. Solusi paling sederhana adalah mengulangi reaksi. ... Jika masih belum ada produk PCR setelah ini maka kemungkinan ada hal lain yang menghambat reaksi Anda.
Berapa banyak DNA yang cukup untuk PCR??
Dalam reaksi khas 50 L, 1-2 unit DNA polimerase cukup untuk amplifikasi DNA target. Namun, mungkin perlu untuk menyesuaikan jumlah enzim dengan template yang sulit. Misalnya, ketika inhibitor hadir dalam sampel DNA, meningkatkan jumlah DNA polimerase dapat meningkatkan hasil PCR.
