Topmusicanswers
Sebaliknya, kondisi PCR perlu dioptimalkan; pertimbangkan hal berikut saat menyesuaikan kondisi PCR:
- Kurangi jumlah template.
- Meningkatkan suhu anil.
- Gunakan touchdown PCR.
- Kurangi jumlah siklus PCR.
- Mendesain ulang primer.
- Gunakan primer bersarang.
- Perkuat kembali produk.
- Mengapa PCR saya tidak berfungsi??
- Bagaimana Anda mengoptimalkan kondisi PCR??
- Apa yang menyebabkan noda di PCR?
- Bagaimana Anda tahu jika PCR terkontaminasi??
Mengapa PCR saya tidak berfungsi??
Melupakan hanya satu komponen dari reaksi PCR, apakah itu DNA polimerase, primer atau bahkan DNA template, akan menghasilkan reaksi yang gagal. Solusi paling sederhana adalah mengulangi reaksi. ... Jika masih belum ada produk PCR setelah ini maka kemungkinan ada hal lain yang menghambat reaksi Anda.
Bagaimana Anda mengoptimalkan kondisi PCR??
Kondisi PCR
- Gunakan suhu denaturasi yang lebih tinggi (e.G., 98°C dibandingkan dengan 94°C atau 95°C) untuk memungkinkan denaturasi sempurna dari template.
- Pertahankan waktu anil untuk template kaya GC sesingkat mungkin.
- Gunakan primer dengan T . yang lebih tinggiM (>68°C), karena anil dapat terjadi pada suhu yang lebih tinggi.
Apa yang menyebabkan noda di PCR?
Kontaminasi DNA, RNA dalam sampel DNA, konsentrasi DNA yang tinggi dalam reaksi PCR dapat menyebabkan noda. ... Pengolesan DNA biasanya terjadi pada tanaman karena konsentrasi DNA cetakan yang tinggi.
Bagaimana Anda tahu jika PCR terkontaminasi??
Untuk memeriksa larutan untuk kontaminasi, kumpulkan reaksi kontrol negatif menggunakan reagen baru yang diketahui tidak terkontaminasi, dan tambahkan salah satu larutan yang dicurigai ke setiap reaksi. Reaksi itu menunjukkan produk yang diperkuat yang menunjukkan kontaminasi adalah bukti bahwa larutan yang ditambahkan terkontaminasi.
