Topmusicanswers
- Masalah apa yang dapat timbul dari amplifikasi PCR??
- Mengapa tidak ada amplifikasi di PCR?
- Apa yang menyebabkan amplifikasi dalam PCR?
- Apa yang menyebabkan kegagalan PCR?
Masalah apa yang dapat timbul dari amplifikasi PCR??
Banyak masalah umum dengan PCR dan RT-PCR diidentifikasi selama elektroforesis gel agarosa dari produk reaksi. Ini termasuk tidak adanya produk amplifikasi yang diharapkan, adanya produk nonspesifik, pengolesan yang berlebihan, dan adanya pita "primer dimer".
Mengapa tidak ada amplifikasi di PCR?
Enzim DNA polimerase tidak bekerja
Enzim DNA polimerase bertanggung jawab untuk perpanjangan primer terikat di sepanjang untai DNA template. Jika enzim ini tidak lagi efisien, mungkin karena pembekuan-pencairan, maka langkah ekstensi selama reaksi PCR tidak akan lengkap, tidak memberikan produk PCR.
Apa yang menyebabkan amplifikasi dalam PCR?
PCR dasar. Proses PCR awalnya dikembangkan untuk mengamplifikasi segmen pendek dari molekul DNA yang lebih panjang (Saiki et al. 1985). Reaksi amplifikasi yang khas meliputi DNA target, DNA polimerase termostabil, dua primer oligonukleotida, deoxynucleotide triphosphates (dNTPs), buffer reaksi dan magnesium.
Apa yang menyebabkan kegagalan PCR?
Biasanya hal pertama yang peneliti lakukan adalah menyalahkan enzim atau reagen yang salah ketika percobaan gagal tetapi dengan PCR ini sebenarnya kecil kemungkinannya menjadi penyebab kegagalan. Lebih sering masalah internal yang lebih dalam seperti desain primer, parameter thermocycler, atau pengikatan nonspesifik ke urutan template lainnya adalah penyebabnya.
